動(dòng)物疫病血凝分析儀型號(hào)：DY-7000

 

試驗(yàn)方法： 
1 血凝（HA）試驗(yàn) 
1） 在V型微量反應(yīng)板的1～12孔均孔加入0.025ml PBS，換滴頭。 
2） 吸取0.025ml血凝抗原加入孔，混勻。 
3） 從第1孔吸取0.025ml血凝抗原加入第2孔，混勻后吸取0.025ml加入第3孔，如此進(jìn)行對(duì)倍稀釋至第11孔，從第11孔吸取0.025ml棄去，換滴頭。 
4） 每孔再加0.025ml PBS。 
5） 每孔均加入0.025ml 1%（V/V）雞紅細(xì)胞懸液（將雞紅細(xì)胞懸液充分搖勻后加入）。 
6） 將反應(yīng)板在振蕩器上震蕩1～2分鐘或輕扣反應(yīng)板混合反應(yīng)物，在室溫（20～25℃）下靜置40分鐘后觀察結(jié)果，（如果環(huán)境溫度太高，可置4℃環(huán)境下），在對(duì)照孔紅細(xì)胞顯著呈鈕扣狀時(shí)判定結(jié)果。 
7） 結(jié)果判定  將板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無呈淚滴狀流淌。*血凝（不流淌）的抗原或病毒高稀釋倍數(shù)代表一個(gè)血凝單位（HAU）。 
2  血凝抑制（HI）試驗(yàn) 
1） 根據(jù)HA試驗(yàn)測定的效價(jià)，計(jì)算配制4個(gè)血凝單位(4HAU)抗原。以*血凝的病毒高稀釋倍數(shù)作為終點(diǎn)，終點(diǎn)稀釋倍數(shù)除以4即為含4HAU抗原的稀釋倍數(shù)。例如，HA效價(jià)為1:256，則4HAU抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1:64（256除以4）。 
2） 加稀釋液： 
在微量反應(yīng)板的第1～11孔加入0.025ml PBS，第12孔加入0.05ml PBS。 
3） 稀釋待檢血清： 
取1號(hào)待檢血清0.025ml加入排第1孔，充分混勻后吸0.025ml于第2孔，依次對(duì)倍稀釋至第10孔，從第10孔吸取0.025ml棄去。 
取2號(hào)待檢血清加入第2排；取3號(hào)待檢血清加入第3排……均按上法稀釋。 
  注意！每取一份血清時(shí)，必須更換吸頭。 
4） 稀釋陰性血清： 
  在血凝板的第7排孔加陰性血清0.025ml，對(duì)倍稀釋至第3孔，混勻后從該孔取出0.025ml棄去。 
    5） 稀釋陽性血清： 
  在血凝板的第8排第1孔加陽性血清0.025ml，對(duì)倍稀釋至第10孔，混勻后從該孔取出0.025ml棄去。 
6） 第1～11孔均加入含4HAU混勻的病毒抗原液0.025ml，在室溫（20～25℃）下靜置30分鐘或2～8℃ 50分鐘。 
7） 每孔加入0.025ml 1%（V/V）的雞紅細(xì)胞懸液，震蕩混勻，在室溫（20～25℃）下靜置20～30分鐘或2～8℃ 45～60分鐘，對(duì)照紅細(xì)胞將呈明顯鈕扣狀沉于孔底。 
結(jié)果判定  
以*抑制4 HAU抗原的高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的HI效價(jià)。 
只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于2log2，陽性對(duì)照血清誤差不過1個(gè)滴度，試驗(yàn)結(jié)果才有效。 
禽流感滅活疫苗的免疫效果判定：家禽免疫后21天進(jìn)行免疫效果監(jiān)測。禽流感抗體血凝抑制（HI）抗體效價(jià)≥24判定為合格 
存欄家禽抗體合格率達(dá)到≥70%判定為合格。 
新城疫免疫效果監(jiān)測：免疫21天后，進(jìn)行免疫效果監(jiān)測?？贵w血凝抑制試驗(yàn)抗體效價(jià)≥25判定為合格 
存欄家禽抗體合格率達(dá)到≥70%判定為合格。 

【注意事項(xiàng)】  
（1）HA和HI試驗(yàn)影響因素甚多，應(yīng)嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件。每加一試劑或樣品后需更換吸頭，同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制作用溫度和時(shí)間。 
（2）準(zhǔn)確配制紅細(xì)胞懸液，使用時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖。 
（3）用pH值7.0～7.2的PBS作為稀釋液。 
（4）抗原和陰、陽性血清若有污染，應(yīng)廢棄。 
（5）準(zhǔn)確配制4HAU抗原，使用前需進(jìn)行滴定，滴定好的抗原應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)用完。 
（6）抗原和血清按規(guī)定保存。凍干試劑應(yīng)按規(guī)定的體積用PBS溶解。溶解后2～8℃保存不過1個(gè)月；可分裝成小包裝，-70℃凍存，隨用隨取。切忌反復(fù)凍融。 
（7）鴨、鵝以及哺乳動(dòng)物的血清一般需進(jìn)行非特異性凝集和抑制素的處理。 
（8）同一亞型不同毒株的HI試驗(yàn)抗原，若抗原性存在差異，則檢測同一血清的HI效價(jià)不同。 
（9）在使用微量加樣器時(shí)，槍頭進(jìn)入試劑瓶面下約2~3ml深處，不可過深。待槍頭撤出液面后斜貼在試劑瓶的瓶壁上，淌走多余的液體，防止形成液滴滴入凝集板孔中。 
（10）雞紅細(xì)胞懸液是現(xiàn)配現(xiàn)用，剩余的放于4℃保存，如果出現(xiàn)溶血現(xiàn)象則不能使用。 
（11）每次檢測可只做一份陰陽性血清對(duì)照試驗(yàn)。 
（12）試驗(yàn)完成后立即上機(jī)判讀，否則易出現(xiàn)紅細(xì)胞下滑現(xiàn)象。 
（13）凍干對(duì)照血清和抗原存放于-20℃，溶解過后存放于4℃。